Kamora matsatsi a 25 a ho ikatisa ho sa fetoheng mochesong oa 28°C, laccase e tsoang ho *Pleurotus ostreatus* NRC620 e bontšitse ts'ebetso e phahameng ka ho fetisisa setsing sa temo ea fungus. Litekanyetso tse ntle tsa pH le mocheso bakeng sa enzyme ena e ne e le 3.0 le 70°C, ka ho latellana. Kamora lihora tse 2 tsa ho ikatisa ho 40°C le 50°C, ts'ebetso ea enzyme e ile ea boloka 68.33% le 59.61%, ka ho latellana. Kamora lihora tse 2 tsa ho ikatisa ho citrate-phosphate buffer (pH 7.0), ts'ebetso ea enzyme e ile ea lula ho 100%. Ho eketsoa ha 10 mM MgSO₄ le CuSO₄ ho ekelitse ts'ebetso ea enzyme ka hoo e ka bang 21% le 35%, ka ho latellana, ha NaCl, MnCl₂, KCl, le CaCl₂ li ile tsa thibela ts'ebetso ea enzyme. Ho sebelisoa ABTS e le substrate, liparamente tsa kinetic (Km le Vmax) tsa *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase e ne e le 1.99 mM le 16,217 μmol min−1 L−1, ka ho latellana. Kalafo ea enzymatic ea lisampole tsa lero la apole e fokolitse pH le viscosity haholo, 'me phokotso ena e amana le keketseho ea nako ea polokelo. Kalafo ea laccase e bakile phokotso e nyane ea kakaretso ea phenolic ea lero la apole, empa ha ho phokotso ea ts'ebetso ea antioxidant e ileng ea bonoa.
Lilemong tsa morao tjena, bafuputsi ba tsepamisitse maikutlo tšebelisong ea theknoloji ea baeloji e tala indastering ea lijo. Laccase ke e 'ngoe ea li-enzyme tse thusang haholo indastering ea lijo, e fumana lits'ebetso libakeng tse kang ts'ebetso ea lero, ho baka, ho tsitsisa veine le ho ntlafatsa litšobotsi tsa organoleptic tsa lihlahisoa tsa lijo.1Limela tse ngata tse phahameng le likokoana-hloko li ntša laccase,2mme di-fungus tse kang deuteromycetes, ascomycetes, le basidiomycetes le tsona di ka hlahisa laccase.3Laccase (EC 1.10.3.2) ke oxidase e putsoa e fokotsang oksijene ea limolek'hule metsing e sebelisa sistimi e nang le liathomo tse tharo tse fapaneng tsa koporo, ka hona e etsa oxidize metsoako e fapaneng ea phenolic le li-amine tse nkhang hamonate. Nakong ea tlhahiso ea lero la litholoana le meroho, ho soothoa ha enzymatic le ho se be le enzymatic ke litaba tsa bohlokoa.4Kaha dintho tsena di ama mmala, tatso le monko wa lero hampe, di lokela ho tloswa.5
Har'a litholoana tsohle, liapole ke tsona tse jeoang haholo lefatšeng ka bophara le Kopanong ea Europe. Ka 2019, tlhahiso ea liapole e ile ea ba ea boraro lefatšeng ka bophara, e feta lithane tse limilione tse 87.6Liapole li na le metsoako e mengata ea phenolic, ho kenyeletsoa le li-flavonoid le li-phenolic acid tse kang caffeic acid le chlorogenic acid.7Kaha lero la apole hangata le nooa ka mokhoa o hlakileng, hoo e ka bang 50% ho isa ho 90% ea likarolo tsa phenolic lia lahleha nakong ea ts'ebetso ea ho sefa.8Kajeno, bareki ba na le tšekamelo ea ho khetha lihlahisoa tse sa sebetsoang hantle haholo, tse kang lero la apole le nang le maru le nang le polyphenol e ngata. Leha ho le joalo, ka lebaka la hore le na le phenolic e ngata, mofuta ona oa lero la apole o kotsing ea ho fifala le ho fifala haholo.9Mekhoa e fapaneng ea theknoloji, ho kenyeletsoa le mekhoa ea kalafo ea mocheso e kang ho pasteurization ho 60–90°C, e sebelisoa ho fokotsa kapa ho thibela ho fifala ha lero la apole.10Leha ho le joalo, ho latela lipatlisiso tsa Sauceda-Gálvez11, ts'ebetso ea mocheso e ka senya lik'hemik'hale tse fetohang le ho ama litšobotsi tsa organoleptic tsa lero la apole. Mekhoa e meng ea ts'ebetso ea mocheso e kenyelletsa carbon dioxide e matla haholo, mahlaseli a ultraviolet, ultrasound, khatello e phahameng ea hydrostatic, kapa homogenization ea khatello e phahameng.12Bokgoni ba mahlale ana le tlhahiso ya lero la ditholwana tse loketseng di itshetlehile hodima di-parameter tse sebediswang le dibopeho tsa dihlahiswa. Tshebediso ya tsona e pharaletseng e lekanyetswa ke ditjeo tse hodimo, ditlamorao tse mpe boleng ba dihlahiswa tse ding tsa dijo, kapa ho se sebetse hantle ha di-enzyme.13,14
Laccase e ka sebelisoa ho tsitsisa le ho hlakisa lero la litholoana.15Gökmen le ba bang.16khothaletsa tšebeliso ea laccase bakeng sa ho hlakisa lero la litholoana hobane e tlosa metsoako ea phenolic ka katleho ka ho e fetola li-polymer kapa li-oligomer tse tlosoang habonolo ke lera lefe kapa lefe la ultrafiltration, e leng se lumellang lero la apole ho boloka 'mala o tsitsitseng le ho hlaka ho fihlela libeke tse tšeletseng mochesong oa 50°C. Laccase e hloekisitsoeng ea *Trichoderma* e ile ea emisoa holim'a lifaha tsa alumina 'me ea sebelisoa ho tlosa metsoako e se nang tatso e bakoang ke tšilafalo ea likokoana-hloko ea lero la apole.17
Hoo e ka bang 80-90% ea likarolo tse fetohang habonolo tsa lero la apole ke li-ester le li-aldehydes, tse fanang ka monko o ikhethang lerong.18Laccase e tsoang ho *Trametes versicolor* e ile ea emisoa ka tšehetso e theko e tlaase e entsoeng ka faeba ea tlhaho e tsoang likhetleng tse nyane tsa kokonate bakeng sa ho hlakisa lero la apole.19Lithuto tse fetileng li batlisisitse ho tsitsisa lero la apole ('mala le mongobo) ka ho sebelisa mekhoa e se nang li-enzyme kapa ea ho thibela ho sisinyeha, kapa hammoho le ho sefa ka bongata.5,19Leha ho le jwalo, phello ya di-laccase tsa fungal hodima thepa ya physicochemical ya lero la apole nakong ya polokelo e ntse e sa hlaka. Ka hona, sepheo sa phuputso ena e ne e le ho batlisisa ka teko diphetoho thepa ya physicochemical, dikahare tsa phenolic compound, le mosebetsi wa antioxidant wa lero la apole kamora kalafo ka di-laccase tsa fungal le polokelo ya dibeke tse pedi e sehatsetsing. Di-laccase di na le bokgoni ba ho oxidation ya metsoako ya phenolic, e leng se etsang hore di tshepise ho sebediswa ditshebetsong tse fapaneng tsa indasteri, ho kenyeletswa le ho hlakisa lero. Phuputso ena e hlahlobile di-laccase tse tswang ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620, e shebane le maemo a loketseng bakeng sa tshebetso ya tsona le katleho ya ho hlakisa lero. Le hoja diphuputso ka di-mushroom tsa oyster (P. ostreatus NRC 620) di ntse di lekanyeditswe, diphuputso tse fetileng di hlahlobile di-enzyme tse tswang mehloding e fapaneng ya fungus, tse kang Trametes versicolor le Ganoderma lucidum. Sepheo sa phuputso ena e ne e le ho lekola tshebediso e ka bang teng ya enzyme ena indastering ya dijo le ho totobatsa thepa ya yona e ikgethang, haholo-holo pH le mocheso wa yona o loketseng.
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) e rekiloe ho Sigma-Aldrich (Canada). Di-reagent tse ding kaofela di ne di le maemong a tlhahlobo.
Setsi sa Naha sa Pokello ea Likokoana-hloko sa Setsi sa Lipatlisiso se fumane mofuta o tsebahalang oa li-mushroom tsa oyster NRC620. Kamora ho lema ka subculture, mofuta ona o ile oa bolokoa holim'a litapole tsa dextrose agar tse nang le litapole mochesong oa 4°C. Mokhoa oa ho lokisa inoculum e ne e le o latelang: mycelium ea matsatsi a 10, e tsoetseng pele ka botlalo e ile ea entoa holim'a lipoleiti tsa potato dextrose agar 'me ea beoa mochesong oa 28°C. Kamora matsatsi a 10, liboloko tse tharo tsa mycelial tse bophara ba 12-mm li ile tsa tlosoa mecheng ea agar ka ho sebelisa punch ea tšepe e sa hloekang 'me tsa kenngoa ka har'a li-flask tsa Erlenmeyer tsa 250-mL ka li-plug tsa k'hothone tse nang le 50 mL ea sterilized culture medium (pH 5.0, joalo ka ha ho hlalositsoe pejana ke Othman et al.20Dikokwanyana di ile tsa futhumatswa mochesong wa 28°C ka matsatsi a 18. Dikokwanyana di ile tsa sefshwa ka pampiri ya sefe ya Whatman No. 1, mme supernatant e hlahang e ile ya sebetsa e le mohlodi wa enzyme.
Mosebetsi oa laccase o ile oa fumanoa ho sebelisoa ABTS e le substrate. Motsoako oa karabelo (2 mL) o ne o e-na le 500 μL ea 0.3 mM ABTS (e qhibilihisitsoeng ka har'a 0.1 M sodium citrate buffer, pH 4.5) le palo e hlokahalang ea sampole ea enzyme e hlapolotsoeng ka metsi a hloekisitsoeng.21,22Ha ho nahanoa hore laccase e ka kopanya ABTS le mochesong oa kamore (28 °C ± 2), ho kopanya ABTS le eona ho ile ha fumanoa ka ho lekanya keketseho ea ho monya ha 420 nm (ε).420= 36,000 cm-1 M -1) ho sebelisoa Agilent Carry-100 UV spectrophotometer. Ho ne ho hlokahala yuniti e le 'ngoe ea ts'ebetso ea laccase ho oxidation ea 1 μmol ABTS ka motsotso. Khakanyo ea protheine e ile ea khethoa ka mokhoa oa Bradford ho sebelisoa albumin ea serum ea likhomo e le taolo ea ka hare.23,24
Kamora ho fumana enzyme ho tsoa mofuteng oa li-mushroom tsa oyster NRC 620, ts'ebetso ea eona e ile ea lekanngoa ka linako tse fapaneng tsa temo ka matsatsi a 25 tlas'a maemo a sa fetoheng ho 28 °C.
Ho ithuta phello ea mocheso mosebetsing oa laccase, liteko li entsoe ka mocheso o pakeng tsa 20 le 90 °C. Pele ho kenyelletsoa enzyme le ho qala karabelo, buffer (0.1 M sodium citrate, pH 4.5) le substrate (ABTS) li ile tsa kopanngoa 'me tsa beoa ka metsing metsotso e 5 mochesong o fapaneng. Botsitso ba mocheso oa enzyme bo ile ba hlahlojoa ka ho beoa ka metsing ho 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) ho 40, 50, 60, le 70 °C ka lihora tse 2, ka ho latellana. Mosebetsi o setseng o ile oa hlahlojoa ka ho sebelisa substrate ea ABTS.
Tšusumetso ea pH mosebetsing oa laccase e ile ea hlahlojoa ho sebelisoa ABTS e le substrate ho 0.1 M citrate-phosphate buffers tse nang le pH e pakeng tsa 2.5 le 7.0. Tharollo ea enzyme e ile ea beoa mochesong oa 40°C ka lihora tse peli ho 0.1 M citrate le Tris buffers (pH 3, 4, 6, le 7) ho lekola botsitso ba pH. Mosebetsi o setseng le ABTS e le substrate o ile oa baloa kamora ho beoa.
Laccase e ile ea beoa ka metsotso e 10 ka har'a sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) e nang le li-ion tse fapaneng tsa tšepe (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, le Mn2+) ka bongata ba 2.5 mM le 10 mM, ka ho latellana. Karolo e ka tlase (ABTS) e ile ea eketsoa ho qala karabelo, 'me mosebetsi o amanang le eona oa hlahlojoa.
Ho kenngwa ha ABTS ka laccase maemong a fapaneng a ho teba (0.025–3 mM) ho lekantswe ho pH 4.5 ho fumana diparamitha tsa kinetic (Vmax le Km).li-constantea equation ea Michaelis-Menten e baliloe ho sebelisoa plot ea Lineweaver-Burk, e bonts'ang sekhahla sa karabelo se latellanang e le ts'ebetso ea mahloriso a substrate. Li-constant tsa kinetic li baliloe ho tsoa plot ea Lineweaver-Burk ho sebelisoa software ea GraphPad Prism version 6.01.
Kamora ho hlatsoa diapole ka botlalo ka metsi a pompo, di ile tsa kgaolwa ka lehare mme tsa tlotswa ka lero ho sebediswa senoko sa apole sa Braun MP80 se iketsang ka botlalo (se entsweng Jeremane). Lero le ile la sefshwa ka dikarolo tse nne tsa lesela la chisi. Ha ho dienzyme tse ileng tsa eketswa sehlopheng sa taolo, ha 2.0% laccase (kgatello e sebetsang ka ho fetisisa e lekilweng) e ile ya eketswa ka lero la apole le sa tswa lokiswa, leo ka nako eo le ileng la bolokwa ho 4°C ka dibeke tse pedi.
Asiti e ka lekanngoang (TA) le pH li ile tsa fumanoa ho latela mokhoa oa Boulton et.al.27. PH ea sampole ka 'ngoe e lekantsoe ho sebelisoa mithara ea pH ea dijithale (JENWAY 3510 pH meter). Asiti e nang le titratable (TA) e baliloe ho latela asiti ea malic ho sebelisoa foromo e latelang.
Moo V le C e leng bophahamo (mL) le mahloriso (0.1 mol/L) ea tharollo ea sodium hydroxide e sebelisoang ho titration, ka ho latellana. K ke coefficient ea phetoho ea malic acid, e lekanang le 0.067, 'me W ke boima (g) ba lero la apole.
Kakaretso ea lintho tse tiileng tse qhibilihang (TDS) diteng tsa disampole tsohle tsa lero di ile tsa lekanyetswa ho sebediswa PAL-1 pocket refractometer (ATAGO, Tokyo, Japane). Kamora tekanyo ka nngwe, lense ya optical e ile ya hlatsuwa ka metsi a hlwekileng, mme sampole ka nngwe ya lero la apole e ile ya lekoa hararo. Boleng ba sampole ka nngwe bo ile ba balwa ka ho lekanya ditekanyo tse tharo. Phapang e tloaelehileng ya ± bakeng sa sampole ka nngwe ya lero la apole le yona e ile ya balwa ka ho lekanya diphetho tsena.
Botebo ba ho teteana ha disampole tsa lero la apole bo ile ba lekoa ho sebediswa viscometer e potolohang (RV, Rheotest 2, Jeremane). Sampole e ile ya bewa ka hara silindara ya "S2" ya viscometer. Botebo bo bonahalang bo ne bo emetswe ke leralla la kgatello ya ho tjhesa kgahlanong le sekhahla sa ho tjhesa, e ileng ya balwa ho tloha kgatellong ya ho tjhesa le di-curve tse tsamaellanang ka ditekanyo tse fapaneng tsa ho tjhesa (ho tloha ho 1.00 ho isa ho 437.4 s⁻¹). Foromo ya ho bala botebo bo bonahalang ke e latelang:
Moo η e leng viscosity e bonahalang (cP), τ ke khatello ea ho shear (dyn/cm²), γ ke sekhahla sa ho shear (sec⁻¹), 'me (τ) e baloa ho sebelisoa boleng ba torque (α) le silindara (Z) ho sebelisoa foromo e latelang: τ = Z. α.
Letšoao la browning le ile la khethoa ho latela mokhoa oa Meidav etal.29. Sampole ea lero la 10-ml e ile ea tšeloa ka seterifuge ho 2750 xg metsotso e 10. 5 ml ea supernatant ea lero e ile ea kopanngoa le 5 ml ea ethanol ea 95%. Ho monngoa ha motsoako ho ile ha lekanngoa ho 420 nm ho sebelisoa Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC).
Kakaretso ea phenolic content (TPC) e ile ea fumanoa ka 'mala o fapaneng ho sebelisoa reagent ea Folin-Ciocalteu joalo ka ha ho hlalositsoe ke Boulton et al.[27]]. Sekotwana se tloaelehileng sa gallic acid se hahiloe bakeng sa mahloriso a tlohang ho 0 ho isa ho 500 mg/L (r²= 0.997). Liphetho li hlahisoa e le tse lekanang le gallic acid (mg GAE/mL).
Kenya 125 μL ea metsi a hloekisitsoeng le 2850 μL ea tharollo ea FRAP ho 25 μL ea lero la apole 'me u siee motsoako lefifing bakeng sa30metsotso. Ebe o lekanya monyako ho 593 nm o sebedisa Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). Reagent ya FRAP e lokisitswe ka ho kopanya 300 mM acetate buffer (pH 3.6), 20 mM iron(III) chloride, le 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (e qhibilihisitsweng ka 40 mM HCl) ka karolelano ya 10:1:1. Kou e tloaelehileng e hlahisitsoe ho sebediswa Trolox e le standard (R²= 0.999), 'me liphetho li hlahisoa e le μM Trolox/mL.
Tšebetso ea antioxidant ea lero le phekotsoeng le le sa phekoloang e ile ea fumanoa ho sebelisoa mokhoa oa DPPH ho lekola bokhoni ba tsona ba ho senya li-free radical tsa DPPH.31Li-microliter tse leshome tsa lero li kopantsoe le 1 ml ea tharollo ea DPPH (100 μM) ka har'a methanol. Kamora karabelo lefifing metsotso e 30, ho monngoa ha motsoako ho ile ha lekanngoa ho 517 nm ho sebelisoa Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). Liphetho li hlahisitsoe e le li-trolox equivalents (μM trolox/ml) ho latela sekhahla sa calibration (R2= 0.990).
Lintlha tse fumanoeng li bontšitse hore tlhahiso e phahameng ka ho fetisisa ea laccase e bonoe ho li-mushroom tsa oyster tsa NRC 620 qetellong ea letsatsi la bo18 la ho belisoa, ho fihlela tšebetso ea 1302 U/L. Sena se sebelitse e le motheo oa ho fumana nako e nepahetseng ea ho lema bakeng sa tlhahiso ea laccase (Setšoantšo sa 1). Leha tlhahiso ea li-enzyme e eketsehile ka nako e ntseng e eketseha ea ho lema, sekhahla sa keketseho se ne se sa lekana ka ho toba le nako ea ho lema; kamora matsatsi a 21, ts'ebetso ea li-enzyme e ne e eketsehile ka 90 U/L feela (ho isa ho 1390 U/L). Ka hona, matsatsi a 18 qetellong a khethiloe e le nako e ntle ka ho fetisisa ea ho lema ho leka-lekanya chai ea sehlahisoa le melemo ea moruo ea nako e eketsehileng ea ho lema.
Tšusumetso ea nako ea temo holim'a chai ea laccase ho Pleurotus ostreatus NRC 620. Liboloko tse tharo (12 mm) tsa mycelial tsa fungus li ile tsa entoa ka har'a 50 ml ea sebaka se hloekileng ebe li lengoa ho 28 °C ka linako tse fapaneng.
Ho latela lithuto tse ling, liphetho tsa rona li bontša hore nako e loketseng ea ho lema ho fihlela tlhoro ea laccase ke li-fungus e ka ba pakeng tsa matsatsi a 7 le a 36.32Ho ea ka Ezike le ba bang.33, *Trametes polyzona* WRF03 e hlahisitse palo e phahameng ka ho fetisisa ea laccase qetellong ea letsatsi la borobong la ho belisoa, ka ts'ebetso e itseng ea protheine ea 1637 U/mg. Ho feta moo, Othman et al.34e fumane hore *Trichoderma harzianum* S7113 e ntša bongata bo boholo ba laccase ka letsatsi la bohlano la temo. Sekhahla sa tlhahiso ea laccase se fihlile sehlohlolong sa ts'ebetso ka letsatsi la leshome le metso e mene 'me sa fokotseha butle-butle.34Leha tlhahiso ea li-enzyme e ka boela ea etsahala nakong ea mohato o moholo oa kholo, hangata e fihla sehlohlolong nakong ea mohato o mahareng 'me e bakoa ke tšebeliso ea mohloli oa khabone kapa oa naetrojene.34,35
Leha laccase e tswang ho Pleurotus ostreatus NRC 620 e bontshitse tshebetso e phahameng hodima mocheso o pharaletseng ho tloha ho 50°C ho isa ho 80°C, e atamela mosebetsi o moholo (69–98%), mosebetsi wa yona o moholo o bontshitswe ho 70°C (Setshwantsho sa 2a). Kantle ho mocheso ona, mosebetsi wa enzyme o fokotsehile ho hoo e ka bang 70°C. Diphetho tsena di bontsha hore enzyme e sebetsa maemong a lehodimo a phahameng, mohlomong hobane mocheso o phahameng o eketsa matla a kinetic a karabelo.
Tšusumetso ea mocheso oa karabelo (a) le pH (b) ts'ebetsong ea laccase ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Lithempereichara tse tlohang ho 20 ho isa ho 90 °C li fihletsoe ka ho kenya motsoako pele ho mocheso o fapaneng metsotso e 5 pele ho eketsa enzyme le ho qala karabelo. Tšusumetso ea pH ts'ebetsong ea laccase e ile ea hlahlojoa ho sebelisoa ABTS e le substrate litharollong tse nang le 0.1 M citrate-phosphate buffer holim'a pH e pakeng tsa 2.5 le 7.0.
Ho ea ka Ezike etal.33, mocheso o motle ka ho fetisisa bakeng sa *Trametes polyzona* WRF03 laccase ke 55 °C, e leng se tšoanang le sa *Ganoderma lucidum*.laccase36le mocheso o ts'oanang le o motle ka ho fetisisa (50 °C) bakeng sa *Trametes polyzona* KU-RNW02737laccase . Baldrian38e hlokomela hore, ha e le ka ditsamaiso tse ding tsa dienzyme tse senyang lignin, mocheso o loketseng laccase o pakeng tsa 50 le 70 °C.
Liphetho li bontšitse hore enzyme e bontšitse ts'ebetso e phahameng ka ho fetisisa ho pH 3.0, e fihletse ts'ebetso ea 94% ho pH 3.5. Leha ho le joalo, e ile ea lula e sebetsa ho pholletsa le pH e pharaletseng ho tloha ho 2.5 ho isa ho 7.0 (Setšoantšo sa 2b). Ho feta moo, e bontšitse ts'ebetso e phahameng maemong a asiti ha e bapisoa le maemo a sa nke lehlakore kapa a alkaline. Ts'ebetso ea eona e ile ea lula bonyane 77% ho feta pH ho tloha ho 2.5 ho isa ho 4.5, empa e fihlile feela ho hoo e ka bang 38% ho pH 7.0. PH e ntle ka ho fetisisa bakeng sa laccase ho tsoa ho *Trametes polyzona* WRF03 e ne e le 4.533, e leng se tšoanang le pH bakeng sa laccases ho tsoa ho *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, le *Trametes hirsuta* 41. Leha ho le joalo, ho latela phuputso ea Chairin et al.42, pH e ntle ka ho fetisisa bakeng sa laccase ho tloha ho *Polymorpha f. sp.* WR710-1 ke 2.2, ha pH e ntle ka ho fetisisa bakeng sa laccase ho tloha ho *Polymorpha f. sp.* IBL-04 e le 5.043. Ho tlamahana ha li-anion tsa hydroxide (laccase inhibitor) ho liathomo tsa koporo tsa laccase ea T2/T3 e ka ba lebaka la ho fokotseha ha ts'ebetso ea laccase tlas'a maemo a pH a sa nke lehlakore kapa a alkaline. Sena se ka sitisa phetiso ea elektrone ea ka hare ho tloha setsing sa T1 ho ea setsing sa T2/T3, ka honaho fokotsamosebetsi oa enzyme23,44
Ka ho futhumatsa enzyme mochesong o fapaneng, ho fumanoe hore nako ea ho futhumatsa le mocheso li amme botsitso ba enzyme. Haholo-holo, laccase e tsoang ho *Trametes polyzona* NRC 620 e bontšitse botsitso bo phahameng ho 40℃ le 50℃, e boloka 68.33% le 59.61% ea ts'ebetso ea eona ea pele, ka ho latellana, kamora metsotso e 120 (Setšoantšo sa 3a). Ka lehlakoreng le leng, tlas'a maemo a tšoanang (40℃ le 50℃, metsotso e 120), laccase e tsoang ho *Trametes polyzona* WRF03 e bolokile 64.38% le 42.92% ea ts'ebetso ea eona, ka ho latellana.33Ho fapana le hoo, ho eketsa nako ea ho ikatisa le mocheso ho fokolitse botsitso ba *Trametes polyzona* NRC 620 laccase; Kamora ho ikatisa ka mocheso oa 60℃ le 70℃ metsotso e 60, ts'ebetso ea eona e ile ea fokotseha ho ea ho 39.24% le 1.72%, ka ho latellana (Setšoantšo sa 3a). Ho latela liphetho tsa liteko, laccase e tsoang ho *Trametes polyzona* WRF03 e bontšitse botsitso bo phahameng ho 40 le 50℃ nakong eohle ea ts'ebetso ea kalafo ea mocheso.33Ka ho tšoanang, Lueangjaroenkit etal.37le Chairin etal.42e tlalehile botsitso ba laccases ho tsoa ho Trametes polyzona KURNW027 le Trametes polyzona WR710-1 ho 50 °C ka hora e le 'ngoe, ka ho latellana. Jwalo ka biocatalyst e thusang e sebetsang masimong a fapaneng a biotechnology, laccase e lokela ho ba le botsitso le tshebetso e ntle hodima mocheso o pharaletseng.
Botsitso ba thermostatic (a) le botsitso ba pH (b) ba laccase ho tsoa ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Botsitso ba thermostatic bo ile ba lekoa ka ho kenya tharollo ea enzyme ka har'a 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) ho 40, 50, 60, le 70 °C ka lihora tse 2, ka ho latellana. Botsitso ba pH bo ile ba lekoa ka ho kenya tharollo ea enzyme ka har'a 0.1 M citrate buffer le Tris buffer (pH 3, 4, 6, le 7) ho 40 °C ka lihora tse 2. Mosebetsi o setseng o ile oa baloa ho sebelisoa ABTS e le substrate kamora ho kenya.
Ho fumana maemo a matle bakeng sa tšebeliso le polokelo ea li-enzyme, re batlisisitse phello ea pH botsitsong ba laccase. Ho pepesehela litekanyetso tse fapaneng tsa pH ho amme haholo botsitso ba sebopeho sa protheine, ka hona ho susumetsa botsitso le ts'ebetso ea molek'hule ea enzyme. Liphetho li bontšitse hore enzyme e ne e sa tsitsa haholo tlas'a maemo a asiti, ha e ntse e bontša botsitso bo betere litekanyetsong tse phahameng tsa pH (libaka tse sa nke lehlakore le tsa alkaline). Litekanyetso tsa pH tsa 7.0, 6.0, 4.0, le 3.0, sekhahla sa ho boloka li-enzyme kamora metsotso e 120 e ne e le hoo e ka bang 100%, 62.54%, 52.39%, le 11.14%, ka ho latellana (Setšoantšo sa 3b). *Strombus multisus* WRF03 laccase e bontšitse botsitso bo phahameng litekanyetsong tse sa nke lehlakore tsa pH (5.5–6.5) le botsitso bo tlase litekanyetsong tsa pH tse nang le asiti (ka tlase ho 4.0). Kamora metsotso e 120 maemong a pH a 5.5, 6.0, le 6.5, sekhahla sa ho boloka li-enzyme e ne e le hoo e ka bang 82%, 100%, le 93%, ka ho latellana.33Khairin le ba bang.42o hlokometse hore laccase e tsoang ho Trametes polyzona WR710-1 e ne e tsitsitse maemong a pH a 6.0 ho isa ho 7.0, ha Sayed et al.45e bontšitse hore laccase e tsitsitse haholoanyane tlas'a maemo a pH a sa nke lehlakore. Leha ho le joalo, laccase e tsoang ho Cerrena unicolor le eona e bontšitse botsitso tlas'a maemo a alkaline (pH 9.0)46. Li-laccase tse ithutiloeng li bontšitse botsitso bo phahameng holim'a mefuta e mengata ea pH. Ena e ka ba tšobotsi ea bohlokoa bakeng sa lits'ebetso tsa indasteri.
Kaha li-ion tse ling tsa tšepe li na le litlamorao tse susumetsang le tse thibelang ts'ebetsong ea li-enzyme, litlamorao tsa tsona ts'ebetsong ea li-enzyme li lokela ho nahanoa lits'ebetsong tsa indasteri. Sena se bohlokoa hobane li-ion tsa tšepe ke lintho tse tloaelehileng tse silafatsang tikoloho tse ka amang botsitso le tlhahiso ea li-enzyme tse tsoang kantle ho naha.47Ho batlisisa liphello tsa li-ion tse ngata tsa tšepe ho laccase ho tsoa ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620, re entse liteko tse tsamaellanang. Joalokaha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa 4, ho latela mofuta oa tšepe e sebelisitsoeng, ho eketsa mahloriso a li-ion tsa tšepe ho tloha ho 2.5 mM ho isa ho 10 mM ho amme hampe mosebetsi oa enzyme. Mohlala,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺leCu²⁺e ka hlohlelletsa le ho kenya tšebetsong ts'ebetso ea li-enzyme, haNa⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺leK⁺e ka thibela mosebetsi oa enzyme. Ka tekanyo ea 10 mM, li-ion tsa Cu²⁺ le Mg²⁺ e ne e le tsona tse susumetsang tšebetso ea laccase ka matla ka ho fetisisa ho tsoa ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620, tse fanang ka tekanyo ea ts'ebetso ea hoo e ka bang 34% le 20%, ka ho latellana. Leha ho le joalo, ka tekanyo ea 10 mM, li-ion tsa Ca²⁺ e ne e le tsona tse thibelang tšebetso ea laccase ka matla ka ho fetisisa, tse fokotsang mosebetsi oa enzyme ka hoo e ka bang 60%.
Tšusumetso ea li-ion tsa tšepe mosebetsing oa Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase. Laccase e ile ea beoa metsotso e 10 ka har'a sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) e nang le li-ion tse fapaneng tsa tšepe maemong a 2.5 mM le 10 mM. Karabelo e ile ea qalisoa ka ho eketsoa ha substrate (ABTS), ka mor'a moo mosebetsi o amanang o ile oa lekanngoa.
Liphetho tsa rona li tsamaellana le tsa bangoli ba bang ba fumaneng hore Mg²⁺ le Cu²⁺ li ntlafatsa ts'ebetso ea *Trametes polyzona* WRF03³. Castaño le ba bang.⁴⁸ ba fumane hore laccase e tsoang ho *Xylaria* sp. e susumetsoa ho isa bohōleng bo itseng ke li-ion tsa koporo (Cu²⁺). Ho feta moo, Foroutanfar le ba bang.⁴⁹ le Si le ba bang.⁵⁰ ba entse lithuto tse tšoanang ho laccase tse tsoang ho *Paraconiothyrium variabile* le *Trametes pubescens*, ka ho latellana. Sebaka sa ho tlama koporo sa mofuta oa II (T2) sa enzyme ena se ka tlatsoa ka Cu²⁺ ka tekanyo e fanoeng, e leng se ka hlalosang ho hlohlelletsoa ha ts'ebetso ea laccase ka tekanyo e phahameng ea Cu²⁺³⁹. Kaha li-fungus tse bolileng tse tšoeu li-laccase ke li-oxidase tse nang le liathomo tse ngata tsa koporo, litlamorao tsa li-ion tsa koporo mosebetsing oa laccase lia fapana 'me li tloha ho tse susumetsang le tse thibelang ho isa ho tse sa nke lehlakore.⁵¹ Ka lehlakoreng le leng, Zhou et al.. [52]e tlalehile horeCu²⁺e thibetse ts'ebetso ea laccase ea bohloa bo ka tlas'a lefatše ba Taiwan (Odontotermes formosanus). Leha ho le joalo, laccases ea Cerena sp. HYB07[53]le Clitocybe maxima[54]ha lia ka tsa angoa ke li-ion tsa koporo.
Ho totobala ha substrate ho ne ho emetswe ke diparamitha tsa yona tsa kinetic (Km le Vmax); ha kamano ya substrate le enzyme e le matla, boleng ba Km bo theoha mme ho totobala ha substrate ho phahame.3,21,55Diparamitha tsa kinetic (Km le Vmax) tsa laccase tse tswang ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620 di ile tsa fumanwa ka ho sebedisa software ya GraphPad Prism 6.0 ka ho rala setshwantsho sa Lineweaver-Burk (Setshwantsho sa 5). Ha ho sebediswa ABTS e le substrate, diphetho e bile 1.99 mM le 16217 μmol.min⁻¹ L⁻¹,Elsayed le ba bang.21e tlalehile hore boleng ba Km bakeng sa oxidation ea ABTS e ne e le 0.1 mM le 0.064 mM, ka ho latellana, e leng se bontšang kamano e phahameng ea li-isoenzyme tsa Lac A le Lac B bakeng sa ABTS. Ho feta moo, boleng ba Vmax e ne e le 0.182 μmol.min⁻¹le 0.603 μmolmin⁻¹, ka ho latellana. Boleng ba Km bo fumanoeng bo ne bo le tlase ho feta ba Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); ho feta moo, boleng ba bona ba Vmax (1429 mmol min⁻¹) le bona bo ne bo le tlase.tlaseha o sebedisa ABTS e le substrate.33 Ka ho tshwanang, boleng ba Km ba Lentinus squarrosulus MR13 le Trametes sp. AH28-2 laccase concentrations e ne e le 0.0714 mM le 0.025 mM, ka ho latellana, mme boleng ba Vmax e ne e le 0.0091 mM min−1 le 0.67 mM min−1 mg−1 (ha e bapiswa le ABTS), ka ho latellana.56,57
Tšusumetso ea mahloriso a ABTS mosebetsing oa laccase ho tsoa ho *Pleurotus ostreatus* NRC 620 e ile ea hlahlojoa, 'me ho ile ha etsoa setšoantšo sa Lineweaver-Burk sa lebelo la karabelo ea pele khahlanong le mahloriso a ABTS. Karabelo ea oxidation ea ABTS e nang le mahloriso a fapaneng (0.025–3.0 mM) ea laccase e ile ea lekanngoa ho pH 4.5 ho fumana liparamente tsa kinetic (Vmax le Km). Li-constant tsa kinetic tsa Michaelis-Menten li ile tsa baloa ho sebelisoa setšoantšo sa Lineweaver-Burk sa lebelo la karabelo khahlanong le mahloriso a substrate. Li-constant tsa kinetic li ile tsa baloa ho tsoa setšoantšong sa Lineweaver-Burk ho sebelisoa software ea GraphPad Prism 6.01.
Lienzyme tse hlakisang tsa setso, tse kang li-pectinase, li hydrolyze pectic substances, li fokotsa viscosity le turbidity. Li qhaqha li-polysaccharide tsa sebopeho ka katleho 'me hangata li sebelisoa hammoho le lienzyme tse ling, tse kang li-cellulase le li-hemicellulase, ho ntlafatsa chai le ho hlaka. Leha ho le joalo, li-pectinase ha li shebane ka ho khetheha le metsoako ea phenolic, e leng eona e tlatsetsang haholo ho turbidity le oxidative browning, haholo-holo ka lero le kang lero la apole le morara.58Ka lehlakoreng le leng, di-laccase di susumetsa ho kenngwa ha metsoako ya phenolic, di di etsa polymer ho ba dimolekhule tse kgolo, tse sa qhibiliheng tse ka tloswang ka ho sedimentation kapa ho sefa. Mokgwa ona ha o ntlafatse feela ho hlaka empa hape o atolosa bophelo ba shelefo ya lero ka ho fokotsa monyetla wa ho ba sootho ha oxidative ho bakwang ke metsoako ya phenolic. Ho feta moo, ditshebetso tsa ho hlakisa tse thehilweng ho laccase di ka etswa tlasa maemo a bonolo a ho sebetsa (pH 3.5–5.5, mocheso wa 25–40 °C), e leng se etsang hore di lokele lero le bonolo ntle le ho beha ditlamorao tsa tsona tsa phepo e nepahetseng kapa tsa organoleptic kotsing.59Lithuto li bontšitse hore kalafo ea pectinase e ka hlakisa lero ka lihora tse 1-2, ha kalafo ea laccase hangata e hloka nako e telele ea karabelo (lihora tse 3-6) ho fokotsa metsoako ea phenolic ka botlalo. Leha ho le joalo, ts'ebetso ena e ka ntlafatsoa ka ho sitisa enzyme kapa ka ho kopanya laccase le mekhoa ea ho hlakisa ea mechine.60Phuputsong ena, tlhahlobo ea li-enzyme tsa setlolo se tala e senotse mesebetsi e meholo ea laccase le α-amylase, ha mesebetsi ea pectinase le xylanase e ne e le tlase haholo, 'me mosebetsi oa cellulase ha oa ka oa fumanoa. Ka hona, phokotso ea turbidity le dikahare tsa phenolic e ne e bakoa haholo ke ketso ea laccase, ha phetoho ea viscosity e ka 'na ea bakoa ke karolo ea ketso ea amylase.
Tafole ea 1 e bonts'a litekanyo tsa fisik'hemik'hale tsa lero la apole le sa tsoa hatelloa le lisampole tse phekotsoeng laccase. Liphetho li bontšitse hore chai ea lero la apole le sa tsoa hatelloa (71.59%) e ne e le tlase ho feta ea lisampole tse phekotsoeng laccase (87.34%). Liphetho tsena li tsamaellana le liphuputso tsa Pilnik le Orange61, ea bontšitseng hore tšebeliso ea li-enzyme ts'ebetsong ea litholoana e ka eketsa chai ea lero, ea ntlafatsa ho sefa, le ho fumana lero la boleng bo holimo le le hlakileng bakeng sa mahloriso. Keketseho ea chai ea lero e bakoa haholo-holo ke keketseho ea litaba tsa tsoekere e qhibilihang ka har'a lero. Nakong ea hydrolysis ea enzymatic ea litholoana, mesoglea le pectin maboteng a sele ea sehlahisoa lia senngoa 'me li fetoloa lintho tse qhibilihang joalo ka tsoekere e sa nke lehlakore le li-acid.62.Boleng ba pH ba lero la apole le phekotsoeng ke enzyme bo ne bo le tlase haholo ho feta ba sehlopha sa taolo (P < 0.05), 'me boleng ba pH ba lihlopha ka bobeli bo eketsehile haholo nakong ea polokelo (Tafole ea 1). Liphetho tsena li tsamaellana le tsa Mark et al.63, ea hlokometseng hore pH ea lero la litholoana tsa cashew e fokotsehile ka mor'a polokelo kamora kalafo ea mocheso. Ho senyeha ha pectin le ho thehoa ha galacturonic acid kamora kalafo ea enzyme e kanna ea ba tsona tse ikarabellang bakeng sa keketseho ea pH nakong ea polokelo. PH ea lisampole tse phekotsoeng ke enzyme e ile ea lula pakeng tsa 4.05 le 4.31 nakong eohle ea polokelo, ha pH ea lero la apole le sa phekoang e ne e le pakeng tsa 4.12 le 4.33.
Bongata ba asiti (TA) ba disampole tse sa phekoloang le tse sa phekoloang ka laccase bo bontšitse mokhoa o fokotsehang ka nako e ntseng e eketseha ea polokelo (Tafole ea 1). Ho fokotseha ha asiti ho bakiloe ke phetoho ea li-acid tsa organic ho ba lik'habohaedreite kapa liketso tsa enzymatic, hammoho le oxidation nakong ea polokelo ea lero.64Bongata ba asiti ba lero la apole le disampole tse phekotsweng ka dienzyme bo ne bo le tlase ho feta ba lero le leng (lero la fragola 0.9%, lero la plum 2.2%, lero la kumquat 1.0%, lero la apricot 2.4%, lero la lamunu 0.8%), empa bo tshwana le ba lero le leng (mohlala, lero la pere 0.3%).62Liphapang tsena tsa lero la apole le sa tsoa hatelloa li ka bakoa ke mabaka a fapaneng a kang maemo a ho hola, mabaka a lefutso, boemo ba khōlo le mekhoa ea ho sebetsana le tsona.65Phokotso ea asiti eohle ea taolo le lero la apole le phekotsoeng ka laccase e tsamaellana le liphetho tse hlahisitsoeng ke Singh et al.66mabapi le phokotseho ea asiti eohle ea lero la apole la Jin Nuo kamora matsatsi a 74 a polokelo. Ka lehlakoreng le leng, Oshmiansky le Wojdylo67Ha ba a ka ba fumana diphetoho tse kgolo boemong ba asiti ba lero la apole ha ba ntse ba ithuta phello ya mekgwa ya setso ya ho hlakisa.
Liphetho tse hlahisitsoeng ho Tafole ea 1 li bontša hore boleng bohle ba metsoako e qhibilihang (TSS) ea lero la apole le phekotsoeng ka laccase bo ne bo le holimo ho feta ba sampole e sa phekoloang. Liphetho tsena li tsamaellana le lithuto tse phatlalalitsoeng.. 68Ho feta moo, Tafole ea 1 e bontša hore boleng ba TSS ba sehlopha sa lero la apole le laoloang e ne e le 9.58 nakong ea pele 'me bo fihlile ho 11.05 qetellong ea nako ea polokelo. Boleng bona bo tlase ho feta boleng ba TSS ba lero la apole le foreshe bo tlalehiloeng ke Hamid et al.. 69(11.2 le 11.80, ka ho latellana). Boleng ba TSS ba disampole tsa lero la apole tse phekotsoeng ka laccase bo eketsehile haholo, ho tloha ho 11.23 mme ba fihla ho 12.93 kamora dibeke tse pedi tsa polokelo ho 4°C (Tafole ya 1). Keketseho e tshwanang ya TSS nakong ya polokelo e bontshitswe le ditholwaneng tsa citrus, dilamunu le dilamunu tse monate. Keketseho ya di-solid tse qhibilihang ka ho felletseng (TSS) nakong ya polokelo e ka bakwa ke hydrolysis ya di-polysaccharides (starch) ho ya ho di-monosaccharides (tswekere), keketseho ya mahloriso ka lebaka la ho fellwa ke metsi ha lero, le ho senyeha ha pectin ka hara lero ho ya ho di-solid tse qhibilihang ka ho felletseng. Keketseho ya di-solid tse qhibilihang ka ho felletseng (TSS) e ka bakwa ke keketseho ya di-suble sullivating, e ka thehwang ke phetoho ya pectin kapa cellulose ho ba di-sullivating ka pectin kapa cellulase, ka ho latellana, kapa ka hydrolysis ya starch ho ba di-sugar, jwalo ka ha ho tlalehilwe ke Hamed et al.69.Tšusumetso ea laccase holim'a thepa ea lero la apole e ka bonoa ka mahlo, kaha lero la apole le phekotsoeng ka laccase le bontša ho phalla hantle le ho ba le viscosity e tlase ho feta lero le sa phekoloang. Tlhokomeliso ena e tlalehiloe ho Tafole ea 1; Viscosity ea sampole e phekotsoeng ka enzyme e ne e le 1.87 cP, ha viscosity ea sampole ea taolo e ne e le 2.95 cP. Phokotso ena e kholo ea viscosity e ka bakoa ke bokhoni bo phahameng ba ho tšoara metsi ba lintho tse kang pectin le ho thehoa ha sebopeho sa marang-rang a kopaneng.
Phuputsong ena, phello ea laccase ho browning index (BI) ea lero la apole e hlahlobiloe ka ho lekanya monya ho 420 nm ho sebelisoa spectrophotometer. Liphetho li bontšitsoe ho Tafole ea 1. Nakong ea polokelo, BI ea lisampole tsa lero la apole lihlopheng tse phekotsoeng le tse sa phekoloang e bontšitse mokhoa o ntseng o eketseha butle-butle. BI e bonahatsa tekanyo ea browning 'me e ka sebetsa e leea bohlokoasesupo sa dikarabelo tsa ho sootho tsa enzymatic le tse seng tsa enzymatic. Monyetla o eketsehile haholo nakong ya polokelo (P < 0.05). Qetellong ya polokelo,A420Boleng ba disampole tsa lero la apole lihlopheng tsa taolo le tse phekoloang ka li-enzyme bo eketsehile ka hoo e ka bang 217% le 121%, ka ho latellana (Tafole ea 1). Liphetho li bontša hore kalafo ea li-enzyme e ka fokotsa tekanyo ea ho sootho ka katleho ka hoo e ka bang 56%. Liphetho tsa Bezerra et al.[19]] li tsamaellana le liphetho tsa rona; Ba sebelisitse faeba ea laccase-glutaraldehyde-kokonate ho hlakisa lero la apole, ba fokotsa 'mala oa lona oa pele ka 61%.
Leha di-polyphenol tse lero la ditholwana di na le ditlamorao tse ntle tsa phepo le kalafo mmeleng wa motho, di ka boela tsa arabela le diprotheine, tsa baka maru a lero, ho ba le seretse, kapa ho ba le mongobo, ka hona tsa fetola tatso le monko wa sehlahiswa mme tsa fokotsa nako ya sona ya ho shelefo.71Sepheo sa phuputso ena e ne e le ho fokotsa ka mokhoa o sireletsehileng dikahare tsa phenolic tsa lero la apole ho sebediswa laccase ho tswa ho Pleurotus ostreatus NRC 620. Diphetho tse hlahisitsweng ho Tafole ya 1 di bontsha hore dikahare tsohle tsa phenolic tsa lero la apole le phekotsweng ka laccase di fokotsehile haholo pele di bolokwa ho 4 °C. Ho feta moo, dikahare tsohle tsa phenolic tsa dikahare le tsona di ile tsa fokotseha nakong ya polokelo disampoleng ka bobedi tse ithutwang (Tafole ya 1). Diphuputso tse entsweng ke Sandri et al.72e bontšitse hore lero la apole le phekotsoeng ka enzyme le ka boloka ts'ebetso ea lona ea antioxidant le dikahare tsa phenolic. Leha ho le joalo, liphetho tsa phuputso ea Lettera et al.73bontša hore kalafo ea lero la lamunu ka fungal laccase e ka fokotsa litaba tsa metsoako ea phenolic ho eona ka ho fihlela ho 45%.
Metswako ya phenolic e bontshitswe e na le thepa e kang ho tlosa di-free radical, ho fokotsa le ho tima oksijene ya singlet, phetiso ya athomo ya haeterojene, le ho nehelana ka dielektrone ho di-free radical, e leng se etsang hore e be di-antioxidants tse matla.74Ka hona, thutong ena, mekhoa e thehiloeng ho DPPH le FRAP e sebelisitsoe ho lekola phello ea laccase mosebetsing oa antioxidant oa lero la apole le bolokiloeng ka sehatsetsing matsatsi a 14 (Tafole ea 2). Mekhoa ena ka bobeli e bontšitse keketseho ea mosebetsi oa antioxidant nakong ea polokelo, e ka bang ka lebaka la keketseho ea metsoako ea phenolic e sa lefelloeng kapa ho thehoa ha lihlahisoa tsa karabelo ea Maillard (MRPs), 'me lihlahisoa tsa karabelo ea Maillard mohlomong ke tsona tse bakang keketseho ea mosebetsi oa antioxidant.75Likarabelo tse seng tsa enzymatic browning (ho kenyeletsoa le ho senyeha ha ascorbic acid, liketso tsa Maillard, le ho senyeha ha tsoekere ho bakoang ke asiti) li hlahisa mebala e sootho (melanoidins). Lihlahisoa tsa ho senyeha ha ascorbic acid tse mahareng le lihlahisoa tsa ho senyeha ha tsoekere (tse kang metsoako ea carbonyl) li ka arabela le li-amino acid ka liketso tsa Maillard.76Leha ho soeufala ha litholoana le meroho nakong ea polokelo ho ithutoa ka botlalo, kutloisiso ea rona ea liketso tsena e ntse e le e fokolang.77Ha ho bapisoa le mokhoa oa FRAP, lero la apole le phekotsoeng ka laccase le bontšitse ts'ebetso e tlase haholo ea antioxidant ka mokhoa oa DPPH (Tafole ea 2), 'me ts'ebetso ea antioxidant ea lisampole tsohle e eketsehile haholo ka nako e eketsehileng ea polokelo. Mekhoa e 'meli e fapaneng ea ho fumana ts'ebetso ea antioxidant e sebelisitsoe thutong ena hobane melao-motheo ea eona e fapana. Mokhoa oa DPPH o lekanya bokhoni ba ho fokotsa li-free radicals, ha mokhoa oa FRAP o lekanya bokhoni ba ho fokotsa li-ion tsa tšepe. Ka hona, ho khothaletsoa ho sebelisa mekhoa e mengata ea ho fumana ts'ebetso ea antioxidant ho utloisisa hamolemo ts'ebetso ea antioxidant ea lisampole tse ithutiloeng.78
E 'ngoe ea liphuputso tsa bohlokoa tsa phuputso ena ke hore *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 e bontša ts'ebetso e ntle ka ho fetisisa ho 70°C le pH 3.0. Ha e bapisoa le li-laccase tse ling tsa fungal tse sebelisoang hangata bakeng sa ho hlakisa lero, joalo ka *Trametes versicolor* le *Ganoderma lucidum* laccases, *P. ostreatus* NRC 620 e bontša botsitso bo phahameng ba mocheso le pH e nang le asiti e ngata. Li-laccase tse tsoang ho *Trametes versicolor* le *Ganoderma lucidum* hangata li bontša ts'ebetso e ntle ka ho fetisisa pakeng tsa 50-60°C le litekanyetsong tsa pH pakeng tsa 3.5 le 5.0. Phapang ena e ka kenya letsoho ntlafatsong ea ts'ebetso ea ho hlakisa lero, haholo-holo bakeng sa lero la asiti moo botsitso litekanyetsong tse tlase tsa pH bo leng bohlokoa. Tšobotsi e ikhethang ea *P. Ha e bapisoa le li-laccase tse ling tsa fungal tse ithutiloeng, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 e bontša bokhoni ba ho sebetsa ka katleho tlas'a maemo a thata haholoanyane. Mocheso o phahameng oa ts'ebetso ea eona o bonts'a melemo e ka bang teng lits'ebetsong tsa indasteri, joalo ka sekhahla se potlakileng sa karabelo le ho fokotseha ha tšilafalo ea likokoana-hloko. pH ea eona e tlase, e loketseng hantle tlhaho ea asiti ea lero le lengata, e ka ba molemo lits'ebetsong tsa ho hlakisa lero. Liphetho tsena li lokafatsa lipatlisiso tse ling bakeng sa ts'ebeliso e kholo, e leng se etsang hore *Pleurotus ostreatus* NRC 620 e be mokhoa o mong o sebetsang ho feta mehloli ea laccase ea fungus ea setso. Ha ho bapisoa le lithuto tse fetileng, re fumane hore mocheso o motle ke 60°C 'me pH e ntle ke 3.0. Kamora karabelo ho 60°C metsotso e 80, *Ganoderma lucidum* laccase e bolokiloe.46% ea mosebetsi oa eona.79 Ho ea ka Kurniawati le Nicelle80, Lienzyme tsa *Ganoderma lucidum* li bontša botsitso bo botle ho isa bo itekanetseng ho 25°C le litekanyetso tsa pH ho tloha ho 5.0 ho isa ho 8.0, le botsitso ho pH 6.0 le mocheso ho tloha ho 10 ho isa ho 30°C. Thutong ena, re fumane hore pH e ntle ka ho fetisisa le mocheso bakeng sa ts'ebetso ea enzyme bakeng sa *Pleurotus ostreatus* e ne e le 3.0 le 70°C, ka ho latellana. Kamora ho ikatisa ho 40°C le 50°C ka lihora tse peli, enzyme e ile ea boloka 68.33% le 59.61% ea ts'ebetso ea eona, ka ho latellana. Ho feta moo, Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase e bontšitse ts'ebetso e phahameng ho feta mocheso o pharaletseng ho tloha ho 50°C ho isa ho 80°C, e batla e fihla ts'ebetsong e phahameng (69%–98%), 'me ts'ebetso e phahameng e bonoa ho 70°C.
Qetellong, oyster mushroom laccase NRC620, e fumanoeng tlas'a maemo a sa fetoheng, e bontšitse ts'ebetso e ntle le botsitso ho pholletsa le mefuta e fapaneng ea pH le maemo a mocheso, e bonts'a botsitso bo phahameng ha bo bapisoa le mehloli e meng ea li-enzyme. Ho eketsoa ha 10 mM MgSO₄ le CuSO₄ ho ekelitse ts'ebetso ea li-enzyme ka hoo e ka bang 21% le 35%, ka ho latellana. Ha e sebetsoa ka lero la apole, enzyme e fokolitse pH le viscosity, ha karolo ea phenolic e fokotsehile hanyane feela nakong ea polokelo.
Liphetho li tiisa bokhoni ba laccase indastering ea lijo, haholo-holo ho hlakisoeng ha lino. Ka ho qhaqha metsoako ea phenolic ka ho khetheha, laccase ha e fokotse feela ho fifala le ho ntlafatsa ho hlaka empa hape e boloka boleng ba lero la litholoana tlas'a maemo a bonolo a ts'ebetso. Ho fapana le metsoako ea setso ea ho hlakisa joalo ka gelatin, bentonite, le silica gel, laccase ha e hlahise litšila kapa ho tlosa monko o monate ho tsoa lino, e leng se etsang hore e be khetho e mosa haholoanyane tikolohong le e tšoarellang. Ho feta moo, ha e bapisoa le li-enzyme tse ling le mekhoa ea ho sefa, laccase e fana ka tharollo e reriloeng le e theko e tlaase ntle le ho beha boleng ba sehlahisoa kotsing.
Kyomuhimbo, HD le Brink, HG. Ditshebediso le mawa a ho thibela ho sisinyeha ha di-laccase tse nang le koporo; tlhahlobo. Heliyon 9, e13156 (2023).
Nako ea poso: Tshitwe-15-2025